Định lượng Micro Albumin niệu bằng kỹ thuật miễn dịch phóng xạ

NGUYÊN LÝ

Kỹ thuật định lượng phóng xạ miễn dịch (RIA)-Micro Albumin (MA) cho phép định lượng invitro MA trong nước tiểu người. Phương pháp dựa trên nguyên lý định lượng miễn dịch phóng xạ cạnh tranh (RIA). Trong quá trình ủ kháng nguyên MA trong mẫu cần đo gắn cạnh tranh KT kháng MA có gắn ¹²⁵I (tracer) với kháng nguyên MA mẫu. Sau khi hút khô và rửa, hoạt độ phóng xạ ở ống nghiệm được đo bằng máy đo gamma. Mức độ gắn sẽ tỷ lệ thuận với nồng độ MA của mẫu đo.

CHUẨN BỊ

Người thực hiện

Bác sỹ chuyên ngành Y học hạt nhân

Kỹ thuật viên xét nghiệm RIA

Kỹ sư , kỹ thuật viên vận hành thiết bị đo mẫu

Cán bộ hóa dược phóng xạ

Phương tiện, hoá chất

Phương tiện

2 máy đo Gamma Counter đo ¹²⁵I và xử trí mẫu tự động theo chương trình .

2 máy lắc ngang ( 200-350 vòng/phút,thường dùng 300 vòng/phút ),

2 máy trộn.

Một giá cắm bộ micropipet có số hút 20 μl, 200 μl, 1.000 μl và các hộp đựng đầu plastic các loại.

Giá cắm ống nghiệm .

Hoá chất

RIA kít định lượng Micro Albumin trong nước tiểu. Thành phần kit gồm:

KT kháng MA của người gắn ¹²⁵I, hoạt độ< 300 kBq.

Dung dịch chuẩn MA với nồng độ đã biết

2 túi x 50 ống nghiệm nhựa

Túi plastic

CHỈ ĐỊNH

Người bệnh có tổn thương cầu thận

Bệnh lý thoái hóa vi mạch

CHỐNG CHỈ ĐỊNH:

Không có.

CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Lấy bệnh phẩm:

Lấy 1-2 ml nước tiểu.

Quy trình định lượng MA

Các ống nghiệm được đánh số đầy đủ (chuẩn, huyết thanh kiểm tra, huyết thanh mẫu) như bảng 1.

Nhỏ 200 μl chuẩn hoặc mẫu bằng pipet vào đáy ống nghiệm. Nên sử dụng đầu pipet mới cho mỗi mẫu.

Thêm vào mỗi ống nghiệm 100 μl ¹²⁵I anti MA.

Các ống nghiệm được lắc trên máy lắc ngang (300 ± 50) vòng/ phút trong 2 h ở 18-25 ^oC.

Thêm vào mỗi ống nghiệm 1 ml đệm rửa, hỗn hợp được gạn hoặc hút và rửa lại bằng 1 ml đệm rửa.

Các ống nghiệm được đo trong 1 phút bằng đầu đo gamma.

NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Số xung/phút của mỗi chuẩn riêng biệt S_o-S₆ được đánh dấu, dựa vào nồng độ MA tương ứng trên đồ thị đã được dựng chiếu theo đó. Đường cong chuẩn phù hợp nhất được xây dựng qua các điểm này.

Các giá trị đo được của huyết thanh kiểm tra và mẫu được đánh dấu trên đồ thị và nồng độ MA được đọc từ đường cong chuẩn.